Για να πετύχουμε το στόχο μας, θα ακολουθηθούν τα παρακάτω μεθοδολογικά βήματα:
- Επιλογή κριών φυλής Λέσβου με βάση τα στοιχεία των αποδόσεων και της γενεαλογίας (που καταγράφονται στο πλαίσιο του μέτρου 10) και την κλινική εξέταση. Έλεγχος της υγείας των (αρχικώς) επιλεγέντων ζώων (βρουκέλλα, προϊούσα πνευμονία, καταρροϊκός πυρετός) και της αντοχής τους σε ασθένειες (scrapie).
- Μεταφορά των επιλεγμένων κριών στις εγκαταστάσεις σπερματοληψίας, εκπαίδευση των κριών στη διαδικασία συλλογής σπέρματος με τη χρήση τεχνητού κόλπου.
- Συλλογή σπέρματος. Εκτίμηση της ζωτικότητας, της κινητικότητας του σπέρματος (εξέταση σε μικροσκόπιο με θερμαινόμενη τράπεζα), και εκτίμηση της πυκνότητας (σε φωτόμετρο)
- Έλεγχος της γονιμοποιητικής ικανότητας του σπέρματος in vitro, με την εφαρμογή κλασσικών και σύγχρονων μεθόδων και τεχνικών. [Δοκιμασίες: εωσίνης-νιγροσίνης, sperm blue, HOST, έλεγχος του δυναμικού της μεμβράνης των σπερματοζωαρίων (τριπλή χρώση: PI, Rhodamine, SYBR-green)]
- Αραίωση του σπέρματος με τροποποιημένα (ή όχι) αραιωτικά του εμπορίου.
- Έλεγχος της γονιμοποιητικής ικανότητας του σπέρματος in vivo. Αυτό θα γίνει με τη διενέργεια Τ.Σ. σε επιλεγμένα θηλυκά, μετά από ορμονικό έλεγχο του οιστρικού τους κύκλου. Η διάγνωση εγκυμοσύνης με υπερηχογραφία θα πραγματοποιηθεί 30-45 ημέρες μετά την Τ.Σ. Θα καταγραφούν οι εξής δείκτες: ποσοστό έγκυων ζώων, ποσοστό ζώων που γέννησαν, αριθμός ζωντανών αρνιών/προβατίνα.
- Συλλογή σπέρματος, διερεύνηση της δυνατότητας κατάψυξης με τη χρήση τροποποιημένων κρυοπροστατευτικών και in vitro έλεγχος της γονιμοποιητικής ικανότητας του σπέρματος κριών φυλής Λέσβου.
